strana 13.

Određivanje antitela na tireoidnu peroksidazu – dalja iskustva

Nebojša Paunković, Džejn Paunković, Ivan Nikolić

SPECIJALISTIČKA ORDINACIJA “DR PAUNKOVIĆ” ZAJEČAR

Tireocitna peroksidaza (TPO) je enzim koji ima ulogu u biosintezi tireoidnih hormona (katalizuje oksidaciju jodida na tirozilske ostatke u tireoglobulinu). Nalazi se na apikalnoj površini tireoita [1]. U toku destruktivnih procesa štitaste žlezde on kao autoantigen inicira nastanak antitela (TPOAb) [2]. Ova autoantitela koriste se u praksi kao marker autoimunih bolesti tireoideje [3]. Mogu da se nađu i kod nekih drugih autoimunih (netireoidnih) stanja [4]. Pre korišćenja analize antitela na tireoidnu peroksidazu, za određivanje tireoidnih autoantitela korišćeno je testiranje antitela na tireoglobulin, a kasnije na tireoidne mikrozome. Poslednjih godina je razjašnjeno da je antigena supstanca u mikrozomima ustvari, tireoidna peroksidaza. Autor je prvi put objavio svoja iskustva 1985. godine [5], a publikovao u inostranom časopisu 1998. godine [6]. Poslednji put je objavljen u ovom časopisu 2017. godine [7]. Tada smo koristili nekoliko metoda za određivanje TPOAb sledećih proizvođača: firme Thermo, firme Roche, Cobas, firme Beckman Coulter i firme Monobind - USA. U ovom radu prikazani su samo rezultati ovog poslednjeg proizvodača, na velikom broju uzoraka, na više ispitanih bolesnika, na zdravim osobama (kontrolna grupa) i u jednom delu u vidu „follow-up“ studije.

CILJ RADA

Pokušali smo da odaberemo metodu koja nam najviše odgovara: da može da se radi i u malom broju uzoraka, na jeftinom mernom uređaju, da daje reproducibilne rezultate, da ima „normalne vrednosti“ kao i druge metode (neke od korišćenih metoda imaju referentne vrednosti do 9 IU/ml, većina ostalih ima između 35 i 60). Kod pacijenata, a i kontrolne grupe zdravih, pratili smo reproducibilnost u toku dužeg vremenskog intervala.

BOLESNICI I METODE

Za određivanje autoantitela na tireoidnu peroksidazu koristili smo Hemiluminescentni imunotest, Monobind mikroplate. Granična vrednost je 40. Monobind Inc. - Lake Forest, CA 92630 USA. Merenje uzoraka smo obavljali na Lumi Stat uređaju. Uređaj je dizajniran da može da se koristi i za mali broj uzoraka.
Metodu smo počeli pre 8 godina - uradili smo preko 2000 uzoraka. Kod pedesetak bolesnika vršili smo i sistematsko praćenje (follow-up studija), na-3-4 meseca, u toku 3-6 godina.

REZULTATI

U poslednjih 8 godina, od kada radimo određivanje TPOAb metodom firme Monobind, uradili smo 2040 uzoraka. Obradili smo veliku kontrolnu grupu zdravih osoba ili bolesnika sa netireoidnim oboljenjima. Vrednosti smo prikazali na grafikonu 1.

Grafikon 1. TPOAb kod kontrolne grupe zdravih osoba, ili bolesnika sa netireoidnim oboljenjima.

Grupa bolesnika sa autoimunim tireoiditisom (Hashimoto), sastojala se od 323 pacijenta sa hipotireozom, i 156 koji su još uvek bili u eutireoidnij fazi, mada smo većini od njih ordinirali supstituciju l-tiroksinom, pogotovo ako su vrednosti antitela na tireoidnu peroksidazu bile jako visoke- preko 1000. IU/ml.
Poslednjih nekoliko godina smo obradili rezultate koje smo dobili kod istih pacijenata u toku praćenja bolesti (follow-up). Hteli smo da proverimo zapažanja koja smo stekli prethodnom studijom [7] - naime da rezultati nisu dovoljno konstantni kod bolesnika koji su na supstiticionoj terapiji tiroksinom. Ovo zapažanje smo ilustrovali na grafikonima 2 i 3.

Grafikon 2. Praćenje koncentracije antitela na tireocitnu peroksidazu od 2016.–2021. godine kod bolesnice P.B.
TPOAb IU/ml

vreme (kvartal)[mes]
Grafikon 3. Praćenje koncentracije antitela na tireocitnu peroksidazu od 2016.–2019. godine kod bolesnice S.C.

DISKUSIJA

Antitela na tireocitnu peroksidazu (TPOAb) su parametar koji se u kliničkom radu koristi za procenu hroničnih tireoidnih oboljenja. Posebno je koristan u prvo opisanoj autoimunoj bolesti – Hashimoto tireoiditisu. Visina ovog parametra verovatno zavisi od stepena destrukcije tireoidnog tkiva. Za razliku od drugog parametra tireoidnog autoimuniteta – antitela na tireotropinske receptore (TRAb), koji se sa prolaskom imunogene hipertireoze vraća u normalu, TPOAb je gotovo uvek konstantan. Zato smo u ovim radovima ispitivali šta bi moglo da utiče na visinu ovih antitela. Razmotrili smo prvo tehničke detalje. Različiti kompleti za testiranje ovog parametra nemaju uvek iste „normalne vrednosti“, npr. firma Beckman Coulter, ima referentne vrednosti do 9 IJ/ml, za razliku od drugih metoda koje imaju gornje granice normale od 35-60 [7]. Verovatno su drugi epitopi korišćeni za imunizaciju kod produkcije autoantitela. Praktičan savet je da se uvek radi istom metodom ako se želi praćenje parametra kod istog bolesnika. Ovo je posebno značajno ako se želi nekim lekovima ili suplementima (selen) da utiče na tok bolesti [8,9]. U ovom radu, u toku „follow-up“ studija, primetili smo da oko 30% pacijenata koji su bili samo na supstitucionoj terapiji tiroksinom, koji ne uzimaju druge lekove koji bi mogli eventualno da utiču na ovaj parametar (TPOAb) nemaju konstantan nivo (grafikon 2 i 3).

ZAKLJUČAK

Prikazali smo rezultate određivanja antitela na tireocitnu peroksidazu. Metoda koju smo koristili daje pouzdane podatke. Sam parametar u rutinskom radu nije pouzdan – u toku kontinuiranog praćenja njegove vrednosti povremeno se javljaju oscilacije za koje nismo našli objašnjenje. Da li se povremeno javlja pojačanje destruktivnih procesa? U ispitivanjima koja će se nastaviti pokušaćemo da nađemo odgovor na to pitanje.

LITERATURA:

1. McLachlan SM, Rapoport B. The molecular biology of thyroid peroxidase: Cloning, expression, and role autoantigen in autoimmune thyroid disease. Endocrine Rev 1992; 13:192-206.
2. Portmann L, Hamada N, Heinrich G, DeGroot LJ. Antithyroid peroxidase antibody in patients with autoimmune thyroid disease: possible identity with anti-microsomal antibody. J Clin Endocrinol Metab 1985; 61:1001-1003.
3. Czarnocka B, Ruf J, Ferrand M, Carayon P, Lissitzky S. Purification of the human thyroid peroxidase and its identification as the microsomal antigen involved in autoimmune thyroid diseases. FEBS Letters 1985;190:147-152.
4. Korkij W, Soltani K, Simjee S, Marcincin PG, Chuang TY: Tissue-specific autoantibodies and autoimmune disorders in vitiligo and alopecia areata: a retrospective study. J Cutan Pathol 1984; 11: 522–30.
5. Paunković N. Pavlović O Paunović R.: Dokazivanje antitireoglobulinskih i antimikrozomskih antitela u hroničnom limfocitarnom tireoiditisu.Zbornik radova, V jugioslovenski simpozijum o štitastoj žlezdi, Zlatibor, 1985, 167-171.
6. Paunkovic N, Paunkovic J. The significance of TSH receptor antibodies and thyroid microsomal antibodies in Graves' disease. Thyroidol Clin Exp 1998; 10:13-17.
7. Paunković N, Paunković Dž. Određivanje antitela na tireocitnu peroksidazu – metodološki aspekti i priprema za kliničku primenu. Tim. Med. glas. 2017;42(4): 206-208.
8. Duntas L.H. Manzou E, Koutras DA. Effects of a six month treatment with selenomethionine in patients with autoimmune thyroiditis. European J of Endocrinology 2003; 148: 389-393.
9. Gartner R., Gasnier BSH., et al. Selenium supplementation in patients with autoimmune thyroiditis decrease thyroid peroxidase antibodies concentrations. JCEM 2002; 87: 1687-1691.